K562-CD19-GFP單克隆細(xì)胞系與CD3-CD19（BiTE雙抗）
CAR-T細(xì)胞療法是近年來推出的新型精準(zhǔn)靶向腫瘤治療技術(shù)，2017年美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）批準(zhǔn)了2項(xiàng)以CD19為分子靶標(biāo)的CAR-T細(xì)胞免疫藥物上市，用于治療多種B淋巴細(xì)胞白血病，從此開啟了細(xì)胞免疫治療的新紀(jì)元。經(jīng)改進(jìn)的CAR-T免疫療法也被用來治療實(shí)體瘤、自身免疫疾病、HIV感染和心臟病等疾病，具有廣闊的應(yīng)用空間。
維真生物科研團(tuán)隊(duì)經(jīng)過精心研究，新推出可以穩(wěn)定表達(dá)CD19抗原和copGFP的K562單克隆細(xì)胞系，該單克隆細(xì)胞系可在殺傷實(shí)驗(yàn)中作為靶細(xì)胞，評估CAR-T細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷力；同時(shí)該單克隆細(xì)胞系攜帶GFP熒光，可通過流式鑒定GFP的陽性率來檢測殺傷效果，從而減少抗體的使用，為客戶進(jìn)行CD19-CAR-T細(xì)胞的體外功能性驗(yàn)證帶來了極大的方便。
1. K562-CD19-GFP單克隆細(xì)胞系——好物低價(jià)
產(chǎn)品名稱：K562-CD19-GFP單克隆細(xì)胞系
產(chǎn)品貨號：CL852678
產(chǎn)品優(yōu)勢： ①穩(wěn)定表達(dá)CD19抗原和copGFP，可作為殺傷實(shí)驗(yàn)中有效的靶細(xì)胞；
②帶有GFP熒光，減少后期殺傷效果檢測中抗體的使用，節(jié)約成本；
數(shù)據(jù)支持：
▽ 單克隆細(xì)胞鑒定實(shí)驗(yàn) ▽
K562細(xì)胞與K562-CD19-GFP單克隆細(xì)胞中CD19與GFP表達(dá)量的鑒定
用流式細(xì)胞術(shù)分別對K562細(xì)胞和K562-CD19-GFP單克隆細(xì)胞中CD19和copGFP的表達(dá)量進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果表明，K562-CD19-GFP單克隆細(xì)胞中CD19表達(dá)量為100%，GFP表達(dá)量為99.4%。
經(jīng)鑒定，該研究成功構(gòu)建了能夠穩(wěn)定表達(dá)CD19和GFP的單克隆細(xì)胞株 K562-CD19-GFP。
2. CD3-CD19雙特異性抗體——好物低價(jià)
產(chǎn)品名稱：CD3-CD19（BiTE雙抗）
貨號：AB000006
作用原理：
CD3-CD19 BiTE是一種雙特異性T細(xì)胞連接蛋白，該蛋白可以連接T細(xì)胞和CD19陽性細(xì)胞，使T細(xì)胞可以選擇性接近靶細(xì)胞進(jìn)而達(dá)到特異性殺傷的效果。BiTE分子是一種融合蛋白，BiTE由兩個(gè)單鏈可變片段（scFv）組成，通過柔性融合接頭串聯(lián)連接。一個(gè)scFv識別T細(xì)胞表面蛋白CD3，另一個(gè)scFv識別特異性腫瘤細(xì)胞表面抗原。
CD3-CD19雙抗不僅是簡單的把T細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞相結(jié)合，其通過與T細(xì)胞表面CD3受體相結(jié)合形成復(fù)合物，進(jìn)一步激活T細(xì)胞信號通路，使T細(xì)胞表達(dá)CD69、CD25，上調(diào)細(xì)胞黏附分子（CD2）、短暫釋放炎癥因子，令T細(xì)胞活化，促使T細(xì)胞增殖，進(jìn)而引起腫瘤細(xì)胞溶胞而死亡。
CD3-CD19雙特異性抗體作用機(jī)制（Krishnamurthy A et al. Pharmacol Ther, 2018.）
流式檢測抗體與T細(xì)胞結(jié)合活性
3. T細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)
效應(yīng)細(xì)胞：激活的T細(xì)胞
靶細(xì)胞：K562-CD19-GFP單克隆細(xì)胞
實(shí)驗(yàn)方法： 按照靶細(xì)胞每孔1*10^4個(gè)，效應(yīng)細(xì)胞每孔1*10^5個(gè)（效靶比為10：1）分別加至96孔板中，再加入CD3-CD19雙特異性抗體進(jìn)行殺傷實(shí)驗(yàn)。
實(shí)驗(yàn)共設(shè)置5個(gè)梯度，分組如下：
GFP陽性細(xì)胞存活率檢測
殺傷24 h后進(jìn)行流式鑒定，觀察GFP陽性細(xì)胞的存活率。結(jié)果表明，T細(xì)胞對K562-CD19-GFP單克隆細(xì)胞有很好的殺傷效果，（效應(yīng)細(xì)胞對靶細(xì)胞）殺傷率可高達(dá)94%，且在一定濃度范圍內(nèi)，GFP陽性細(xì)胞的數(shù)量與抗體濃度呈負(fù)相關(guān)。
綜合上述研究結(jié)果，我們得出以下結(jié)論：本研究成功構(gòu)建了一株單克隆穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系K562-CD19-GFP，而且利用CD3-CD19雙特異性抗體進(jìn)行的殺傷實(shí)驗(yàn)表明，該細(xì)胞株能作為T細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)中的有效靶細(xì)胞，這一細(xì)胞株為客戶進(jìn)行CD19-CAR-T細(xì)胞的體外功能性驗(yàn)證帶來極大的方便。
5. 服務(wù)
本研究中成功構(gòu)建的K562-CD19-GFP單克隆細(xì)胞系，和所使用的CD3-CD19 BiTE雙特異性抗體，維真均可為您提供，兩者可結(jié)合使用，評估效應(yīng)T細(xì)胞的殺傷效率；此外，CD19與copGFP共表達(dá)的病毒我們也有現(xiàn)貨供應(yīng)，好物低價(jià)，任您選擇。真誠歡迎各位新老客戶咨詢訂購！熱線電話：400-077-2566。
