維真生物 sgRNA文庫
基因敲除是實現(xiàn)功能缺失型篩選的重要手段，已被廣泛應(yīng)用于靶向藥物研究、抗性基因篩選、基因功能研究、基因組轉(zhuǎn)錄激活研究及蛋白質(zhì)運輸及定位等方向。
目前已經(jīng)廣泛應(yīng)用的RNAi技術(shù)的靶標(biāo)是mRNA，而CRISPR通過RNA識別DNA序列然后再改變DNA序列，是可以遺傳的。由于編碼mRNA的DNA序列只占總DNA的極少部分，因此靶向DNA序列的CRISPR的靶標(biāo)要比RNAi廣得多，更有可能篩選出針對某DNA序列的特異CRISPR靶標(biāo)。
在CRISPR/Cas9系統(tǒng)中，sgRNA 與 Cas9 核酸內(nèi)切酶的復(fù)合物能在目的片段生成DNA雙鏈斷裂（double-strand breaks,DSBs），誘發(fā)由非同源末端連接（NHEJ）修復(fù)機制造成的移碼突變。CRISPR/Cas9系統(tǒng)可同時沉默多個基因，并具有十分廣泛地應(yīng)用范圍，已報道成功應(yīng)用于細菌、酵母菌、植物、魚類和哺乳動物中。目前，更加便捷高效的CRISPR sgRNA 文庫已逐漸取代 shRNA 文庫。
維真生物的人源基因sgRNA慢病毒文庫及小鼠基因sgRNA AAV文庫配合維真提供的Cas9穩(wěn)定表達細胞系，將助您在更短的時間內(nèi)實現(xiàn)高通量篩選！
一、 維真生物 sgRNA文庫相關(guān)產(chǎn)品及服務(wù)
1. sgRNA質(zhì)粒/病毒
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文庫名稱
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靶向基因名稱及數(shù)量
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sgRNA數(shù)量
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病毒滴度
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人源基因sgRNA
慢病毒文庫
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人源基因 19114個
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76441個
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1×108IU/mL
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激酶基因 763個
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3052個
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1×108IU/mL
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小鼠基因sgRNA
慢病毒文庫
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小鼠基因 20611個
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130209個
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1×108IU/mL
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2. Cas9穩(wěn)轉(zhuǎn)株
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細胞名稱
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來源
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穩(wěn)定表達基因
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HEK293
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人
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Cas9
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Neuro-2A
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小鼠
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3. Cas9穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建服務(wù)
維真生物可根據(jù)您實驗所需，針對您實驗?zāi)康募毎?，?gòu)建Cas9穩(wěn)轉(zhuǎn)株。詳情可聯(lián)系銷售人員。
二、 維真生物 Cas9的活性檢測
Cas9的活性檢測，可以通過Cas9質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細胞后觀察測序結(jié)果中的套峰來實現(xiàn)。
Cas9會在識別位點造成DNA雙鏈斷裂，斷裂處通過易錯修復(fù)，易造成隨機突變。正因如此，通過識別位點上下游引物進行PCR后，產(chǎn)物實為兩類PCR產(chǎn)物的混合物，分別是原本序列的PCR產(chǎn)物和突變序列的PCR產(chǎn)物。通過對PCR產(chǎn)物進行測序，將會出現(xiàn)套峰樣結(jié)果，表明Cas9為有活性的。如未觀察到套峰，表明Cas9沒有活性或活性極低。
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Cas9活性檢測結(jié)果（測序出現(xiàn)套峰樣結(jié)果）
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三、sgRNA文庫高通量篩選技術(shù)及其優(yōu)勢
SgRNA 文庫高通量篩選技術(shù)，指的是利用sgRNA質(zhì)粒/病毒文庫，感染cas9穩(wěn)定表達細胞系，進而達到高通量篩選的目的。
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SgRNA文庫高通量篩選技術(shù)
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相比傳統(tǒng)shRNA文庫，sgRNA文庫具有無可比擬的優(yōu)勢。不僅在操作上節(jié)約時間成本，還具有更廣泛的應(yīng)用范圍和更卓越的修飾效果。
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SgRNA文庫高通量篩選技術(shù)的優(yōu)勢
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