光遺傳學(optogenetics)又稱光刺激基因工程(optical stimulation plus genetic engineering),是一種通過光學和遺傳學技術(shù)在活體動物腦內(nèi)精準控制細胞行為的技術(shù)。由于其高度的時空特異性,光遺傳技術(shù)廣泛應(yīng)用于神經(jīng)科學研究領(lǐng)域。
2010年,光遺傳學技術(shù)榮膺Nature Methods 年度生命科學技術(shù)。 2010年,被Science認為是近十年的突破之一。 光遺傳學技術(shù)再次被Nature Methods評為2016年值得關(guān)注的八項技術(shù)之一。 未來,光遺傳技術(shù)將對神經(jīng)及精神領(lǐng)域疾病的治療及神經(jīng)科學以外的組織功能研究貢獻更多力量。
一、光遺傳學之前
1979年,F(xiàn)rancis Crick提出,神經(jīng)科學領(lǐng)域急需開發(fā)出一種控制技術(shù),進而在不改變其它條件的情況下對大腦里的某種細胞進行操控。由于電刺激信號(electrode)無法對細胞進行精確的定位刺激,而化學藥物起效速度慢,無法精確定時控制,于是Crick考慮是否可以利用光控技術(shù)。雖然微生物學家們早已發(fā)現(xiàn)一些可以表達可見光敏蛋白(visible light-gated protein),但當時還沒人將此聯(lián)系在一起。
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二、光遺傳學
1.光遺傳學的發(fā)展歷程
2005年8月Karl Deisseroth實驗室發(fā)表的一篇文章為神經(jīng)領(lǐng)域的科學家們帶來了一項期待已久的新技術(shù)——光遺傳學技術(shù)。這項技術(shù)的實現(xiàn)基于單組分控制工具——光敏蛋白的發(fā)現(xiàn)。
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2.光遺傳學原理
2005年8月Karl Deisseroth實驗室發(fā)表的一篇文章為神經(jīng)領(lǐng)域的科學家們帶來了一項期待已久的新技術(shù)——光遺傳學技術(shù)。這項技術(shù)的實現(xiàn)基于單組分控制工具——光敏蛋白的發(fā)現(xiàn)。
利用光敏通道蛋白在微秒級別通過光控制某一特殊類型的神經(jīng)元。當使用特定波長的光照射神經(jīng)元時,細胞膜上的光敏感離子通道將加速細胞與細胞外界區(qū)域間陽離子與陰離子的交換。光遺傳學實際上是通過基因改造,使特定的神經(jīng)元細胞展現(xiàn)出光敏感特性,同時不改變細胞的其他生理學特性。
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光遺傳學的基本原理(以ChR2和NpHR為例)
3、光遺傳學操作步驟
在光遺傳操作中,細胞會表達特定的編碼光敏蛋白的基因,然后使用光來改變細胞的行為。光遺傳學技術(shù)的應(yīng)用主要包括以下幾個關(guān)鍵步驟:
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4、光遺傳學所需的輔助技術(shù)
光遺傳學技術(shù)包括的范圍是廣泛的。主要包括以下幾種。
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5、光遺傳學技術(shù)的優(yōu)勢——高時空分辨率
光遺傳學技術(shù)在根本上解決了如何精確調(diào)控細胞行為的問題。這基于其具有高度時空特異性的優(yōu)勢。光遺傳學技術(shù)在時間上控制精度可達毫秒(ms)級別,空間精度可達單個細胞級別,是電信號刺激和化學藥物所無法比擬的。
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6、維真生物光敏通道蛋白
光敏感通道蛋白名稱 | 描述 |
ChR2 | 陽離子通道蛋白,來源于萊茵衣藻 |
ChR2(H134R) | 陽離子通道蛋白,ChR2的突變體,可產(chǎn)生兩倍的光電流,但開關(guān)速度比野生型ChR2慢一倍。 |
ChETA | 陽離子通道蛋白,ChR2的突變體,使神經(jīng)元在激光刺激下可以發(fā)出200Hz的峰值(其他只可達到40Hz)。 |
C1V1 | 陽離子通道蛋白,由ChR1和由團藻發(fā)現(xiàn)的VChR1組合在一起的通道蛋白,在紅色激光刺激下打開通道。 |
NpHR(Halorhodopsin) | 氯泵,在黃綠激光激活下會將氯離子打進神經(jīng)元內(nèi),而抑制神經(jīng)元活動。NpHR3.0相比NpHR帶有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體輸出元件及來自鉀離子通道的膜元件,能夠?qū)崿F(xiàn)在神經(jīng)元細胞膜上的有效聚集。 |
Arch T(Archaerhodopsin) | 質(zhì)子泵,在黃色激光激活下將帶正電的質(zhì)子轉(zhuǎn)移到細胞外。在特定條件下,可用于增加細胞內(nèi)pH或減少細胞外基質(zhì)的pH。與NpHR相比,當激光關(guān)閉時,Arch立即恢復(fù)到關(guān)閉狀態(tài)。Arch3.0相比NpHR帶有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體輸出元件及來自鉀離子通道的膜元件,能夠?qū)崿F(xiàn)在神經(jīng)元細胞膜上的有效聚集。 |
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